AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：阻断AMPK-ULK1通路介导的自噬，在BC中促进细胞凋亡以增加阿霉素的敏感性的一项体外研究
自噬通量的激活促进乳腺癌细胞对现有化疗药物的耐药性，严重限制了化疗药物的疗效，导致临床BC细胞的复发。然而，人们对于其详细的机制仍未完全了解。本研究中，证实AMPK-ULK1信号在体外介导了保护性自噬，通过抑制该信号能够提高阿霉素的药物敏感性。具体实验中，研究人员采用细胞计数(CCK-8)试验和集落形成试验评价细胞增殖能力。利用台盘蓝染色法检测细胞活力，Annexin V-FITC/ PI双染色法检测细胞凋亡。通过电镜观察并拍摄BC细胞自噬体。同时，利用Western Blot分析在蛋白水平上检测基因表达。
将亲代阿霉素敏感的BC (DS-BC)细胞暴露于逐步增加浓度的阿霉素环境中，建立耐阿霉素的BC (DR-BC)细胞。与DS-BC细胞相比，DR -BC对大剂量阿霉素刺激的耐受性显著增强(P<0.05)。有趣的是，在DR-BC细胞中，高剂量阿霉素特异性地增加LC3B-II/I比值，促进自噬体的形成，降低p62的表达水平。在DS-BC细胞中，则没有发现类似的自噬促进作用。引入自噬抑制剂3-MA后增加了大剂量阿霉素对DR-BC细胞的杀伤作用(P<0.05)。此外，研究证实了大剂量阿霉素通过激活AMPK-ULK1通路，在DR-BC细胞中触发了保护性自噬。在功能上，大剂量阿霉素可增加DR-BC细胞磷酸化AMPK (P -AMPK)和ULK1 (P -ULK1)的表达水平，激活AMPK-ULK1通路(P<0.05)。引入AMPK抑制剂（compound C）和ULK1 抑制剂(SBI-0206965)可阻断细胞自噬，促进大剂量阿霉素处理的DR-BC细胞死亡，减缓细胞生长(P<0.05)。
结论:体外数据表明，阻断AMPK-ULK1信号级联介导的保护性自噬可能是增加阿霉素对抗BC敏感性的潜在策略。
CCK-8试剂盒 (Abmole, M4839) 为MTT 法的替代方法，是一种基于WST(水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
作者在研究过程中，首先建立了耐药细胞株。通过低剂量阿霉素连续逐级增加浓度，从亲原代DS-BC细胞中诱导出耐阿霉素的DR-BC细胞。在A-D中，采用CCK-8法检测细胞增殖能力，获得了优质的数据结果。其中，CCK-8试剂盒购自Abmol。CCK试剂盒使用方便，省去了洗涤细胞，不需要同位素和有机溶剂；检测灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；其重复性也优于MTT法。
鸣谢：Yu, Libo & Shi, Qingtao & Jin, Yan & Liu, Zhixin & Li, Jiaxin & Sun, Wenzhou. (2020). Blockage of AMPK-ULK1 pathway mediated autophagy promotes cell apoptosis to increase doxorubicin sensitivity in breast cancer (BC) cells: an in vitro study. 10.21203/rs.3.rs-49604/v2.
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